前言

程序性死亡配體1（PD－L1）是一種典型的免疫表面蛋白，通過其胞外結(jié)構(gòu)域與T細(xì)胞上的程序性細(xì)胞死亡受體1（PD－1）結(jié)合。隨后，T細(xì)胞活性被抑制，腫瘤免疫耐受增強(qiáng)�？筆D－1／PD－L1免疫檢查點(diǎn)療法阻斷PD－1／PD－L1的結(jié)合，使耗竭的T細(xì)胞恢復(fù)活力，從而抑制腫瘤生長。

外泌體是由多種細(xì)胞分泌的具有生物活性的脂質(zhì)雙層納米囊泡，介導(dǎo)細(xì)胞間的信號(hào)傳遞。研究表明，PD－L1不僅可以在腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中的其他細(xì)胞表面表達(dá)，還可以從腫瘤細(xì)胞中釋放并以細(xì)胞外形式存在。外泌體PD－L1的免疫調(diào)節(jié)作在腫瘤免疫抑制中起著不利作用，同時(shí)，其在體液診斷中的具有極大的潛力。外泌體PD－L1有可能成為克服抗PD－1／PD－L1抗體治療耐藥性的重要靶點(diǎn)。

PD－L1與外泌體

PD－1在多種免疫細(xì)胞中表達(dá)，包括外周活化T細(xì)胞、B細(xì)胞和單核細(xì)胞。PD－1的兩種已知配體是程序性死亡配體1 PD－L1（B7－H1）和PD－L2（B7－DC）。PD－L1是一種典型的免疫表面蛋白，通過其細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與T細(xì)胞上的PD－1結(jié)合。大量研究表明，PD－L1在許多腫瘤中異常表達(dá)，如皮膚、大腦、甲狀腺、食管和結(jié)直腸腫瘤。PD－L1抑制T細(xì)胞的活性，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫耐受性，從而阻止可能損害腫瘤的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤的免疫逃逸。

外泌體是具有生物活性的細(xì)胞外囊泡，直徑約30–120 nm，具有由各種細(xì)胞分泌的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)。外泌體是在多泡內(nèi)小體（MVEs）成熟過程中由內(nèi)小體膜出芽形成的腔內(nèi)小泡（ILV）。MVE可以與溶酶體融合，導(dǎo)致細(xì)胞外囊泡的降解及其內(nèi)容物的循環(huán)，從而促進(jìn)細(xì)胞代謝。MVE還與細(xì)胞膜融合，導(dǎo)致ILV在細(xì)胞外釋放，這些從細(xì)胞釋放的ILV被稱為外泌體。

外泌體可以由各種細(xì)胞類型釋放，并穩(wěn)定存在于所有體液中。已廣泛證實(shí)外泌體促進(jìn)細(xì)胞之間的通訊以及蛋白質(zhì)、核酸和其他物質(zhì)的交換。外泌體精確地將許多生物成分轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞，是影響遠(yuǎn)處細(xì)胞基因表達(dá)的有效途徑。

外泌體PD－L1的特征

PD－L1在腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)，并促進(jìn)腫瘤免疫逃逸。然而，細(xì)胞表面PD－L1介導(dǎo)的腫瘤免疫逃逸是暫時(shí)的，依賴于IFN－γ。此外，PD－L1在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)時(shí)間極短。PD－L1也表達(dá)于宿主免疫細(xì)胞表面，尤其是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）。當(dāng)PD－L1從腫瘤細(xì)胞表面消失時(shí)，宿主免疫細(xì)胞上的PD－L1表達(dá)得以維持。因此，盡管腫瘤細(xì)胞表面的PD－L1在免疫逃逸中起一定作用，但免疫抑制腫瘤微環(huán)境的建立主要是通過在TAMs表面表達(dá)PD－L1來實(shí)現(xiàn)的。

除了在細(xì)胞表面表達(dá)外，PD－L1還從腫瘤細(xì)胞釋放到細(xì)胞外空間，成為游離PD－L1，包括外泌體PD－L1和可溶性PD－L1（sPD－L1）。最近的研究表明，外泌體PD－L1在腫瘤免疫抑制中起著重要作用。與sPD－L1相比，外泌體PD－L1不易被細(xì)胞外蛋白水解酶降解，可誘導(dǎo)T細(xì)胞功能障礙并提高穩(wěn)定性。因此，了解細(xì)胞上的PD－L1是如何組裝成外泌體是很重要的。        

研究表明，EGFR的負(fù)調(diào)節(jié)因子ALIX調(diào)節(jié)某些外泌體內(nèi)容物的組裝，并控制外泌體PD－L1和細(xì)胞表面PD－L1之間的平衡。在ALIX敲除細(xì)胞中，MVE中PD－L1的比例大于ILV中的比例，這表明需要ALIX將PD－L1從MVE膜處理到ILV中。此外，巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞（DC）會(huì)釋放含有PD－L1的外泌體�？傊�，腫瘤或免疫細(xì)胞與外顯子PD－L1之間的聯(lián)系可能非常復(fù)雜。

外泌體PD－L1對(duì)T細(xì)胞的影響

越來越多的證據(jù)表明，外泌體PD－L1在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮作用，并通過促進(jìn)T細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。腫瘤細(xì)胞源性外泌體PD－L1與CD8＋T細(xì)胞上的PD－1受體相互作用，削弱CD8＋T細(xì)胞的功能，誘導(dǎo)其凋亡，并促進(jìn)腫瘤免疫逃逸。因此，外泌體表面的膜蛋白通過直接的蛋白質(zhì)相互作用在多種腫瘤中發(fā)揮作用。            

幾乎所有先前關(guān)于PD－L1和T細(xì)胞之間相互作用的研究都是基于腫瘤細(xì)胞表面PD－L1介導(dǎo)的免疫抑制模型。Yang等人發(fā)現(xiàn)外泌體PD－L1位于靶細(xì)胞表面并與PD－1結(jié)合，表明外泌體將功能性PD－L1轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞。Poggio等人的研究表明，在存在外泌體PD－L1的情況下，腫瘤引流淋巴結(jié)中的T細(xì)胞表達(dá)耗竭標(biāo)志物，脾臟縮小。通過在遺傳水平上去除外泌體或PD－L1，T細(xì)胞的激活、增殖并且殺傷潛能顯著增強(qiáng)。當(dāng)外源性外泌體PD－L1被重新引入時(shí)，效果被逆轉(zhuǎn)。

外泌體PD－L1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化

以往的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤來源的外泌體可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的M2極化。然而，關(guān)于腫瘤源性外泌體中PD－L1是否影響巨噬細(xì)胞極化的研究很少。事實(shí)上，不難看出PD－L1在不同腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)。腫瘤免疫逃逸的重要機(jī)制是T細(xì)胞PD－L1與PD－1的結(jié)合，從而引起免疫檢查點(diǎn)反應(yīng)。近年來，隨著外泌體PD－L1研究的增多，其在腫瘤免疫逃逸中的作用變得越來越重要。

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，外泌體PD－L1和細(xì)胞表面PD－L1具有相同的膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。腫瘤分泌的含有PD－L1的外泌體可以有效地將外泌體PD－L1轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞，并削弱腫瘤微環(huán)境中的抗腫瘤免疫。Liu等人證實(shí)，通過增加黑色素瘤外泌體PD－L1的表達(dá)，可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的M2極化，從而最終導(dǎo)致抗PD－1／PD－L1治療的耐藥性。此外，該方法與直接上調(diào)巨噬細(xì)胞PD－L1導(dǎo)致的腫瘤免疫逃逸和抗PD－L1治療結(jié)果一致。所有這些都表明腫瘤源性外泌體PD－L1可以通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化來促進(jìn)腫瘤免疫逃逸。

外泌體PD－L1的臨床應(yīng)用前景

外泌體PD－L1檢測(cè)方法

外泌體PD－L1的水平可以反映某些癌癥類型中腫瘤的發(fā)生情況，并與免疫治療的反應(yīng)密切相關(guān)。因此，檢測(cè)外泌體PD－L1水平可作為現(xiàn)有免疫檢查點(diǎn)測(cè)量的補(bǔ)充，以提高診斷的準(zhǔn)確性。

目前，外泌體PD－L1的公認(rèn)定量檢測(cè)方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。然而，這種方法有一定的局限性。當(dāng)外泌體PD－L1表達(dá)過低（＜200 pg／ml）時(shí)，無法區(qū)分患者和健康人。此外，Huang等人提出了一種稱為HOLMES－ExoPD－L1的檢測(cè)方法，該方法過應(yīng)用比PD－L1抗體具有更高識(shí)別效率的適配體，檢測(cè)靈敏度顯著提高。Pang等人提出了一種體外檢測(cè)血漿外泌體PD－L1的方法，該方法涉及使用納米顆粒通過結(jié)合TiO2殼和外體磷脂的親水性磷酸鹽來富集外泌體。Liu等人開發(fā)了一種高度靈敏、實(shí)時(shí)、無標(biāo)記的光學(xué)檢測(cè)方法，不需要納米材料，并有效降低了檢測(cè)成本。令人驚訝的是，該方法比傳統(tǒng)的ELISA檢測(cè)方法具有更高的檢測(cè)靈敏度。

癌癥的早期診斷與預(yù)后

外泌體被廣泛認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境之間的一種新型串?dāng)_模式。一些研究已經(jīng)闡明，外泌體甚至代表了TME中免疫抑制因素參與腫瘤進(jìn)展周期的機(jī)制。當(dāng)前許多研究表明，檢測(cè)外泌體PD－L1的表達(dá)水平對(duì)于腫瘤的早期診斷具有重要意義。

Li等人的研究表明，非小細(xì)胞肺癌患者（尤其是晚期患者）的外泌體PD－L1水平顯著高于健康對(duì)照組。外泌體PD－L1水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)陽性狀態(tài)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期顯著相關(guān)。相反，sPD－L1水平與腫瘤大小以外的臨床病理特征無關(guān)。上述研究表明，外泌體PD－L1可能成為肺癌診斷的一個(gè)有希望的生物標(biāo)志物。

此外，在黑色素瘤患者血漿中，外泌體PD－L1水平顯著高于sPD－L1，所有患者均檢測(cè)到外泌體PD－L1。盡管外泌子PD－L1的水平與臨床病理特征無關(guān)，但治療后的變化（ΔExoPD－L1）與腫瘤對(duì)治療的反應(yīng)有關(guān)，并且已證實(shí)外泌體PD－L1的增加與腫瘤進(jìn)展有關(guān)。

另外的研究也表明外泌體PD－L1水平與胃癌分期之間存在顯著相關(guān)性，外泌體PD－L1表達(dá)較高的組生存率更差。外泌體PD－L1高表達(dá)患者的OS顯著低于低表達(dá)組患者的OS，表明外泌體PD－L1對(duì)早期胃癌患者OS的預(yù)測(cè)價(jià)值。上述研究表明，外泌體PD－L1比腫瘤和血清PD－L1更可靠，對(duì)癌癥的早期診斷和預(yù)后有重要意義。

外泌體PD－L1作為生物標(biāo)志物

目前，F(xiàn)DA已批準(zhǔn)多種種PD－1／PD－L1抗體用于治療人類癌癥，抗PD－1／PD－L1療法顯示出深遠(yuǎn)的應(yīng)用前景。目前，PD－L1的免疫組織化學(xué)（IHC）染色在臨床實(shí)踐中是常規(guī)方法，以預(yù)測(cè)抗PD－1／PD－L1免疫治療的效果。但相當(dāng)多PD－L1 IHC染色陽性的NSCLC患者的免疫治療效果仍不理想。同樣在胃癌患者中，并非所有PD－L1陽性患者對(duì)抗PD－1有反應(yīng)，甚至PD－L1陰性患者也有反應(yīng)。

這一令人失望的結(jié)果的原因尚不清楚，但很可能TME中PD－L1通路的整合機(jī)制尚未完全理解。最近的研究表明，外泌體PD－L1可能反映腫瘤和免疫細(xì)胞之間的動(dòng)態(tài)相互作用，外泌體PD－L1可以反映抗PD－1治療是否成功觸發(fā)抗腫瘤免疫。目前，循環(huán)外泌體PD－L1已被用作抗PD－1治療臨床反應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物。作為IHC PD－L1檢測(cè)方法的重要補(bǔ)充，對(duì)于預(yù)測(cè)PD－1／PD－L1抗體的治療效果可能會(huì)大大改善。

小結(jié)

腫瘤源性外泌體PD－L1在腫瘤免疫逃逸中起關(guān)鍵作用。目前，細(xì)胞表面或外泌體PD－L1介導(dǎo)腫瘤免疫以實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的機(jī)制有多種，如誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞凋亡、促進(jìn)T細(xì)胞耗竭、增強(qiáng)Treg功能、抑制T細(xì)胞增殖、抑制受損的T細(xì)胞活化和IL－2產(chǎn)生。

在臨床上，外泌體PD－L1在非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤、胃癌、乳腺癌和HNSCC等多種癌癥的診斷、治療和預(yù)后方面具有重要的臨床價(jià)值。外泌體PD－L1水平的測(cè)量補(bǔ)充了現(xiàn)有的PD－L1測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)了免疫相關(guān)腫瘤診斷的準(zhǔn)確性。此外，外泌體PD－L1有助于預(yù)測(cè)抗PD－L1／PD－1治療的效果。然而，腫瘤源性外泌體PD－L1的研究還有很多未知，在臨床實(shí)踐中的應(yīng)用還有很多工作要做。

參考文獻(xiàn)：

1．Effectsof Tumor－Derived Exosome Programmed Death Ligand 1 on Tumor Immunity andClinical Applications． Front Cell Dev Biol． 2021； 9： 760211．

       原文標(biāo)題 : 腫瘤源性PD-L1外泌體