概述  

迄今為止,與傳統(tǒng)的抗癌治療策略相比,免疫治療被認(rèn)為是最有前景的全身性腫瘤治療方法,在提高治療效果方面發(fā)揮著不可或缺的作用,尤其是對(duì)難治性癌癥的治療。新興的癌癥免疫療法包括癌癥疫苗、嵌合抗原受體的T細(xì)胞(CAR-T)治療、細(xì)胞因子治療、免疫檢查點(diǎn)抑制劑和腫瘤靶向單克隆抗體(mAbs)。其中,單克隆抗體因其特異性靶向分子的能力,已成為癌癥治療中一種關(guān)鍵和有效的治療方式。然而,由于腫瘤復(fù)雜的疾病發(fā)病機(jī)制,針對(duì)單一靶點(diǎn)的單克隆抗體往往不足以表現(xiàn)出足夠的治療效果。因此,針對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)的雙特異性抗體(bsAbs)應(yīng)運(yùn)而生,它的發(fā)展改變了腫瘤免疫治療的領(lǐng)域。

由于能夠同時(shí)針對(duì)腫瘤細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境(TME)中的兩個(gè)表位,bsAbs逐漸被成為下一代治療性抗體的一個(gè)重要和富有前景的組成部分。目前正在開(kāi)發(fā)的大多數(shù)bsAbs被設(shè)計(jì)成通過(guò)將免疫細(xì)胞,特別是細(xì)胞毒性T細(xì)胞,與腫瘤細(xì)胞緊密相連,從而形成一個(gè)人工免疫接觸,最終導(dǎo)致靶向腫瘤細(xì)胞的選擇性攻擊和裂解。雖然存在多種bsAb形式,但根據(jù)FC片段的存在與否,可將其大致分為兩類(lèi):IgG樣和非IgG樣。Fc片段的存在顯著地發(fā)揮了額外的效應(yīng)器功能。目前,許多臨床前和臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中。然而, bsAb藥物在腫瘤治療中的應(yīng)用仍然面臨著巨大的挑戰(zhàn),包括腫瘤異質(zhì)性和突變負(fù)荷、難以控制的腫瘤微環(huán)境、激活T細(xì)胞的共刺激信號(hào)不足、持續(xù)注射的必要性、致命的全身副作用和脫靶的毒性作用。針對(duì)這些問(wèn)題,本文提出了多種策略來(lái)解決這些問(wèn)題,包括制備多特異性bsAb、發(fā)現(xiàn)新抗原、將bsAb與其他抗癌藥物結(jié)合、開(kāi)發(fā)基于NK細(xì)胞的bsAb和原位制備bsAb。

bsAb的設(shè)計(jì)策略

bsAb通過(guò)同時(shí)結(jié)合不同的抗原或表位而表現(xiàn)出雙重特異性,它們?cè)谀[瘤治療領(lǐng)域受到了廣泛的關(guān)注,主要有四種作用:(a)重新定向特異性免疫效應(yīng)細(xì)胞,選擇性地破壞癌細(xì)胞;(b)靶向多種細(xì)胞表面抗原,從而提高靶向特異性;(c)向腫瘤內(nèi)輸送藥物;以及(d)通過(guò)阻斷兩種生物學(xué)途徑來(lái)提高治療效力和持久性。在這些功能中,最常用的一種功能是使免疫效應(yīng)細(xì)胞靠近癌細(xì)胞,從而降低全身毒性,規(guī)避耐藥性,bsAb大致分為兩組:(a)IgG樣(有Fc區(qū))和(b)非IgG樣(無(wú)Fc區(qū))。

具有Fc區(qū)的IgG樣bsAb由于其較大的尺寸和FcRn介導(dǎo)的再循環(huán)過(guò)程,比沒(méi)有Fc區(qū)域的bsAb具有更長(zhǎng)的循環(huán)半衰期。純化更方便,溶解度和穩(wěn)定性提高。更重要的是,它可能具有更大的臨床治療潛力,以保留多種Fc介導(dǎo)的效應(yīng)器功能,包括抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(ADCC)、補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(CDC)和Ab依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用。

非IgG樣bsAb片段相比之下,顯示出相對(duì)較低的循環(huán)動(dòng)力學(xué),但具有更好的組織穿透能力,較低的免疫原性,以及較低的固有免疫系統(tǒng)的非特異性激活。這種形式的bsAb主要依賴(lài)于其抗原結(jié)合能力發(fā)揮多種功能。

為了延長(zhǎng)非IgG樣結(jié)構(gòu)的半衰期,同時(shí)保持其原有的生物活性、安全性和低免疫原性,可采用多種策略來(lái)增加其分子量并延長(zhǎng)其在血清中的半衰期:(a)用肽接頭使Ab片段形成多聚體;(b)與其他分子如人血清白蛋白、聚乙二醇(PEG)、碳水化合物、N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)和葡聚糖偶聯(lián)。Ab片段的多聚化,以多聚單鏈抗體為例,是非IgG類(lèi)似形式的核心策略。

bsAb技術(shù)平臺(tái)的發(fā)展歷史  

bsAb的歷史可以追溯到1961年,當(dāng)時(shí)Nisonoff和Rivers首次提出通過(guò)混合不同的Ab片段來(lái)產(chǎn)生多特異性Abs的概念。在雜交瘤技術(shù)和化學(xué)重組方法分別于1975年和1985年建立的早期階段,BSAb的產(chǎn)生依賴(lài)于雜交瘤體細(xì)胞融合產(chǎn)生四瘤體或兩個(gè)不同單抗的F(ab′)2分子的化學(xué)異共軛。然而,因?yàn)榛瘜W(xué)偶聯(lián)可能使bsAb失活、展開(kāi)或聚集,bsAb的進(jìn)一步發(fā)展受到阻礙。同時(shí),四元體技術(shù)常常錯(cuò)誤地組裝重鏈和輕鏈,從而導(dǎo)致所需配對(duì)的產(chǎn)率降低,并產(chǎn)生意想不到的免疫反應(yīng)。從本質(zhì)上講,正確的重鏈-輕鏈配對(duì)通常包括兩個(gè)方面:(a)兩個(gè)不同的重鏈的正確配對(duì);(b)輕鏈與相應(yīng)的正確重鏈相結(jié)合。這些問(wèn)題迫切需要改進(jìn)方法來(lái)產(chǎn)生正確配對(duì)的bsAb。最初,重鏈/輕鏈的錯(cuò)配問(wèn)題是在1995年通過(guò)創(chuàng)造一個(gè)嵌合的鼠/鼠源四聯(lián)體來(lái)解決的,這保證了同源重鏈的正確配對(duì)。例如,臨床批準(zhǔn)的catumaxomab由小鼠IgG2a抗CD3半抗原與大鼠IgG2b抗上皮細(xì)胞粘附分子(EpCAM)半抗原組成。1998年,相同的輕鏈配對(duì)兩個(gè)重鏈的應(yīng)用也顯示出了效果。然而,重鏈錯(cuò)配和免疫原性仍然存在,臨床應(yīng)用范圍有限,需要更好的解決方案。

迅速發(fā)展的基因工程技術(shù)為克服上述缺點(diǎn)提供了機(jī)會(huì),這促進(jìn)了第二波bsAb的開(kāi)發(fā)。這些新開(kāi)發(fā)的bsAb的生產(chǎn)主要依靠重組DNA技術(shù),在控制bsAb的大小、親和力、雙特異性、半衰期、穩(wěn)定性、溶解度和生物分布等屬性的同時(shí),能夠產(chǎn)生嵌合或人源化的抗體,以滿(mǎn)足所需目標(biāo)產(chǎn)品的不同需求。1996年,Ridgway等人描述了利用CH3結(jié)構(gòu)域突變產(chǎn)生人源化抗CD3×CD4雜交的“knobs into holes”(KiH)方法。這種方法是通過(guò)在bsAb的一個(gè)重鏈中用一個(gè)小的氨基酸替換大的氨基酸(hole),在bsAb的另一個(gè)重鏈(knob)中反之,最終根據(jù)靜電導(dǎo)向理論引導(dǎo)形成異源二聚體而不是同源二聚體。利用噬菌體展示技術(shù)篩選出形成穩(wěn)定異二聚體的CH3突變體。此外,為了減少單體或同源二聚體雜質(zhì),一些研究人員進(jìn)一步設(shè)計(jì)重鏈的CH3結(jié)構(gòu)域,以添加鏈間二硫鍵,進(jìn)一步提高異二聚體并提供純化的可能性。該技術(shù)還可通過(guò)將肽、蛋白質(zhì)配體或Ab片段融合到Fc鏈的兩端來(lái)產(chǎn)生各種類(lèi)型的異二聚體蛋白質(zhì)。之后,稱(chēng)為CrossMab的新技術(shù)的出現(xiàn)進(jìn)一步減少了重鏈/輕鏈配對(duì)的副產(chǎn)物。這是通過(guò)在一個(gè)Abs的Fab區(qū)內(nèi)交換重鏈和輕鏈結(jié)構(gòu)域來(lái)實(shí)現(xiàn)的,從而導(dǎo)致VH-VL和CH1-CL之間界面的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,以完整的Fc和抗原結(jié)合域構(gòu)建了抗血管生成素-2和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a的CrossMab-bsAb,其穩(wěn)定性和親和力均高于其親本抗體。CrossMab形式可進(jìn)一步分為三個(gè)亞型,CH1配CL(CrossMabCH1-CL),VH配VL(CrossMabVH-VL),或VL-CL配VH-CH1(CrossMabFab)。CrossMab不需要序列優(yōu)化或附加接頭,成為設(shè)計(jì)新型bsAb的一種有吸引力的方法。此外,它可以與KiH結(jié)合,以確保重鏈的正確配對(duì)。

隨著基因工程技術(shù)的進(jìn)步,以及噬菌體展示、蛋白質(zhì)工程、轉(zhuǎn)基因小鼠等多種方法的出現(xiàn),目前已發(fā)展出100多種bsAb形式。這些新開(kāi)發(fā)的形式規(guī)避了以前的制造問(wèn)題,如不穩(wěn)定、低收率和免疫原性,從而加速了從試驗(yàn)臺(tái)到臨床的速度。如上所述,通用的bsAb格式可以簡(jiǎn)單地分為兩類(lèi)。一方面,除了quadromas、KiHs和CrossMab外,IgG-like形式還包括雙可變域Ig(DVD-Ig)、IgG單鏈Fv(IgG-scFv)、二合一或雙作用Fab抗體(DAF)和κλ-body等形式。

另一方面,非IgG樣形式包括單鏈抗體、納米抗體、dock and lock(DNL)方法和其他多價(jià)分子。單鏈抗體是指兩個(gè)來(lái)自親本Ab輕鏈和重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的組合,即VH和VL。它們通過(guò)一個(gè)肽接頭連接,通常是(G4S)3序列�；�于單鏈抗體的形式包括scFvs、sdAb、ta-scFv、diabodies、TandAbs和DART。在這種格式中,BiTE是最典型和應(yīng)用最廣泛的一種。美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)和歐洲藥品管理局(EMA)分別于2014年12月和2015年12月批準(zhǔn)了抗CD19×CD3的blinatumomab(Blincyto;Amgen),用于治療費(fèi)城染色體陰性的復(fù)發(fā)或難治性前體B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALLs)。迄今為止,各種bsAb形式已在其他多個(gè)綜述中都有總結(jié)。

bsAb的臨床應(yīng)用

bsAb的首次臨床試驗(yàn)是在1990年進(jìn)行的。利用化學(xué)偶聯(lián)的抗CD3單抗OKT3和抗膠質(zhì)瘤單抗NE150治療惡性膠質(zhì)瘤。1995年,bsAb首次通過(guò)靜脈注射抗CD3×CD19的bsAb治療化療耐藥的非霍奇金淋巴瘤(NHL)。令人失望的是,雖然觀察到有限的全身毒性,但該試驗(yàn)沒(méi)有臨床反應(yīng),只觀察到血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)和CD8+T細(xì)胞增加。同年,第一個(gè)BiTE,由兩個(gè)靶向CD3和17-1A的單鏈抗體連接而成,也就是抗CD19×CD3的blinatumab的前體。1997年,針對(duì)FcγRIII(CD16)和霍奇金相關(guān)抗原CD30激活NK細(xì)胞的bsAb在臨床I/II期研究中顯示出令人鼓舞的抗腫瘤活性。利用重組DNA技術(shù),blinatumomab避開(kāi)了以前產(chǎn)量低、副產(chǎn)品不明確和純化程序復(fù)雜的問(wèn)題。一年后,Blinatumomab在德國(guó)和瑞典進(jìn)入了人類(lèi)研究的第一個(gè)階段,其中21例復(fù)發(fā)或難治性NHL患者接受短期靜脈注射。直到2004年,NHL患者才首次觀察到blinatumomab有意義的臨床反應(yīng),劑量為每天15?g/m2。幾年后,blinatumomab被用于廣泛的臨床試驗(yàn),直到最后通過(guò)FDA和EMA的批準(zhǔn)。在隨后的幾年里,blinatumomab的治療范圍進(jìn)一步拓寬,2018年,隨著FDA批準(zhǔn)其用于首次或第二次完全緩解后MRD≥0．1%的pre-B ALL患者群體的治療,bsAb領(lǐng)域經(jīng)歷了爆炸式增長(zhǎng),未來(lái)臨床發(fā)展前景廣闊。

抗原變異逃逸的解決方案

為了同時(shí)處理兩個(gè)靶點(diǎn),同時(shí)保持它們的效力,產(chǎn)生bsAb的第一步是確定合適的靶抗原。與傳統(tǒng)的Abs類(lèi)似,bsab的靶點(diǎn)應(yīng)滿(mǎn)足以下標(biāo)準(zhǔn):(a)它們?cè)诎屑?xì)胞而不是鄰近的正常細(xì)胞中有明顯的表達(dá),以避免非特異性毒性(也稱(chēng)為“靶向非腫瘤”毒性);(b)它們與惡性腫瘤表型或防止抗原突變引起的免疫耐受的信號(hào)通路密切相關(guān)。目前,只有一小部分腫瘤相關(guān)抗原(TAA)被識(shí)別并嚴(yán)格滿(mǎn)足上述標(biāo)準(zhǔn),這一點(diǎn)令人沮喪。其中CD19最具代表性,CD19在大多數(shù)B-ALL上表達(dá),對(duì)B細(xì)胞的發(fā)育和功能是必不可少的,因此是CAR-T細(xì)胞或基于bsAb的免疫治療的重要靶點(diǎn)。然而,有報(bào)道稱(chēng),CD19特異性CAR-T細(xì)胞或抗CD19×CD3的BiTE在B-ALL治療中的失敗歸因于CD19的基因突變,導(dǎo)致CD19細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的丟失,構(gòu)象變化,向細(xì)胞表面的轉(zhuǎn)運(yùn)受損,或從ALL到急性髓細(xì)胞白血病(AML)的表型轉(zhuǎn)化。因此,如果只有一個(gè)TAA靶向癌細(xì)胞,所選TAA的基因改變可能會(huì)對(duì)免疫治療的效果構(gòu)成威脅,這給我們帶來(lái)了一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。

策略1:發(fā)展多特異性抗體;以避免單一靶點(diǎn)相關(guān)的免疫無(wú)效,一些研究者提出多靶點(diǎn)抗體的想法,以同時(shí)識(shí)別靶癌細(xì)胞表面的多種抗原,提高親和力。例如,產(chǎn)生促紅細(xì)胞生成素的肝細(xì)胞(Eph)受體家族的三個(gè)成員EphA2、EphA4和EphB4參與了許多惡性腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移,它們都是很有吸引力的抗腫瘤治療靶點(diǎn)。在此基礎(chǔ)上,通過(guò)將抗EphB4/EphA4雙抗體連接到完整的抗EphA2抗體的C端,設(shè)計(jì)了一種三特異性抗體。這一策略的另一個(gè)例子是雙靶向單鏈抗體的三特異性抗體同時(shí)識(shí)別AML癌細(xì)胞上的CD123和CD33。與單靶向藥物相比,它表現(xiàn)出明顯更強(qiáng)的抗腫瘤活性。此外,靶向內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、HER2、HER3和VEGF的四特異性Abs在體外和體內(nèi)也顯示出比單靶向藥物更有效的抗腫瘤效果,并且能夠破壞其親本bsAb誘導(dǎo)的耐藥性。

策略2:新抗原的發(fā)現(xiàn);由于其高突變負(fù)荷和對(duì)當(dāng)前腫瘤免疫治療明顯的耐藥性?xún)A向,因此識(shí)別新抗原并確定相關(guān)內(nèi)在機(jī)制為改進(jìn)抗腫瘤策略鋪平道路是一項(xiàng)挑戰(zhàn),但也是緊迫的任務(wù)。簡(jiǎn)而言之,新抗原,也稱(chēng)為腫瘤特異性抗原(TSA)來(lái)源于非同步體細(xì)胞突變,在腫瘤細(xì)胞中特異性表達(dá),而在正常細(xì)胞中完全缺失。以前,大多數(shù)免疫療法針對(duì)的是TAA,因?yàn)樗鼈兺ǔＴ谝唤M腫瘤類(lèi)型中過(guò)度表達(dá),因此覆蓋了更廣泛的患者群體,如CD19。然而,基于TAA治療的累積研究報(bào)告了正常組織潛在的損傷,同時(shí)臨床療效不理想。相反,TSAs在腫瘤細(xì)胞中有選擇性的表達(dá),并且在不同的個(gè)體之間存在差異,從而為T(mén)SA依賴(lài)的免疫治療提供了個(gè)性化的機(jī)會(huì)。

一般來(lái)說(shuō),Ab靶點(diǎn)的選擇大致分為三代:(a)第一代由“已驗(yàn)證抗原”組成,這些抗原已被廣泛的實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)所證實(shí);(b)第二代包括修飾肽,這意味著要么是與“驗(yàn)證抗原”不同的表位,要么是屬性改進(jìn)的相同表位;(c)第三代包括根據(jù)基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)或基于細(xì)胞的功能策略篩選出的那些新發(fā)現(xiàn)的抗原。顯然,TSAs的識(shí)別與第三代Ab靶點(diǎn)密切相關(guān)。從技術(shù)上講,全外顯子組測(cè)序與快速發(fā)展的軟件算法相結(jié)合是目前識(shí)別新抗原最有趣和最有前途的方法。全外顯子組測(cè)序是基因組相關(guān)技術(shù)中最重要的一種,包括獲取DNA樣本、將其拆分成碎片、篩選提取編碼片段,擴(kuò)增片段,測(cè)序片段,最后用參考基因組分析結(jié)果。根據(jù)DNA密碼子配對(duì)原理,突變的DNA序列被轉(zhuǎn)化為抗原中的氨基酸交替。隨后,各種算法可用于預(yù)測(cè)對(duì)MHC分子具有高結(jié)合親和力的新抗原�；�于細(xì)胞的方法利用整個(gè)癌細(xì)胞作為平臺(tái),選擇性地生成相應(yīng)的單克隆抗體。篩選出與癌細(xì)胞表面抗原結(jié)合活性高的抗原。

避免T細(xì)胞無(wú)能免疫治療的組合策略

在宿主免疫監(jiān)視過(guò)程中,T細(xì)胞是抗原提呈細(xì)胞向T細(xì)胞受體(TCR)遞呈MHC肽復(fù)合物、提供二級(jí)共刺激信號(hào)激活原始T細(xì)胞、促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞增殖的重要前哨細(xì)胞。相反,如果共刺激分子缺失或被共抑制分子替代,即免疫檢查點(diǎn),T細(xì)胞功能失活或無(wú)能,從而無(wú)法特異性地清除腫瘤細(xì)胞。在眾多免疫檢查點(diǎn)中,程序性死亡受體1(PD-1,也稱(chēng)為CD279)是最重要的以及廣泛研究的分子。它在TME的T細(xì)胞上表達(dá),并與其配體PD-L1相互作用于腫瘤細(xì)胞或腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞,介導(dǎo)腫瘤免疫抑制。同時(shí),已觀察到bsAb依賴(lài)性治療的臨床療效不足可能部分歸因于TME中的免疫抑制,尤其是通過(guò)PD-1/PD-L1通路。例如,一項(xiàng)針對(duì)diabody格式的抗AC133×mCD3 bsAbs的研究報(bào)告了放療誘導(dǎo)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)的凋亡以及隨后腫瘤的生長(zhǎng),這是由PD-1途徑介導(dǎo)的。因此,額外的PD-1阻斷劑對(duì)增加TIL的數(shù)量非常有益,恢復(fù)抗腫瘤免疫效果,提高生存率�？偟膩�(lái)說(shuō),組合策略主要包括免疫檢查點(diǎn)阻斷、CAR-T細(xì)胞和迄今為止的其他策略。

策略1:同時(shí)應(yīng)用BSAB和免疫檢查點(diǎn)抑制單克隆抗體;免疫檢查點(diǎn)抑制劑的應(yīng)用促進(jìn)了T細(xì)胞協(xié)同抗腫瘤免疫治療的發(fā)展,特別是聯(lián)合應(yīng)用,招募和動(dòng)員T細(xì)胞對(duì)抗癌癥。在一項(xiàng)研究中,在小鼠模型中應(yīng)用抗CD33×CD3的BiTE(AMG330)可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞PD-1上調(diào),并顯示出顯著受損的T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞溶解。相反,阻斷PD1/PD-L1相互作用增強(qiáng)了AMG330介導(dǎo)的細(xì)胞溶解。在另一項(xiàng)研究中,在anti-CEA×CD3的BiTE前雙重給藥抗PD-1和抗PD-L1單抗可有效地阻斷TME中的免疫抑制,并使效應(yīng)T細(xì)胞的細(xì)胞毒性最大化。在臨床試驗(yàn)中,聯(lián)合應(yīng)用bsAb和免疫檢查點(diǎn)抑制劑也可以協(xié)同作用,提高抗腫瘤效果和患者生存率。此外,在先前的抗藥性HER2+乳腺癌治療研究中,觀察到使用HER2-TDB(一種基于曲妥珠單抗的T細(xì)胞招募bsAb)以及PD-L1抑制劑時(shí)的抗腫瘤效果。這些益處包括增強(qiáng)腫瘤生長(zhǎng)抑制和增強(qiáng)反應(yīng)持久性。最近,通過(guò)DNL方法構(gòu)建新型三價(jià)T細(xì)胞重定向bsAb,即,(E1)-3s和(14)-3s,分別針對(duì)Trop-2和CEACAM5,與PD-L1阻斷劑聯(lián)合應(yīng)用,在體外和體內(nèi)均顯示出增強(qiáng)的抗腫瘤活性。

策略2:以免疫檢查點(diǎn)為靶點(diǎn)的bsAb;這是同時(shí)利用免疫檢查點(diǎn)阻斷和bsAb技術(shù)的另一個(gè)有吸引力的選擇,結(jié)果是設(shè)計(jì)同時(shí)針對(duì)免疫檢查點(diǎn)和腫瘤抗原的bsAb,這在策略上優(yōu)于免疫檢查點(diǎn)抑制劑和bsAb的組合。從機(jī)制上講,這是通過(guò)與TAA陽(yáng)性癌細(xì)胞中的PD-1/PD-L1阻斷劑結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)的。例如,一種抗PD-L1×EGFR bsAb來(lái)激活EGFR過(guò)表達(dá)腫瘤細(xì)胞中的PD-L1阻斷劑。它具有對(duì)稱(chēng)的四價(jià)taFv-Fc形式的結(jié)構(gòu),具有一個(gè)Fc域來(lái)介導(dǎo)相關(guān)功能。已證實(shí),抗PDL1×EGFR-bsAb可增強(qiáng)腫瘤部位的Ab積聚,同時(shí)預(yù)防多種上皮性惡性腫瘤(如結(jié)直腸癌和非小細(xì)胞肺癌)的嚴(yán)重系統(tǒng)性自身免疫相關(guān)不良事件。同樣,一些研究人員設(shè)計(jì)了兩種新的bsAb:抗PD-1×c-Met DVD-Ig和IgG單鏈抗體,這兩種抗體在體外和體內(nèi)均表現(xiàn)出有效的抗腫瘤免疫活性。同樣,另一種靶向PD-L1和硫酸軟骨素蛋白多糖4(CSPG4)的bsAb用于治療黑色素瘤和其他CSPG4+惡性腫瘤時(shí),在維持PD-1/PD-L1的安全性的同時(shí),也有助于提高抗腫瘤的療效和選擇性。此外,使用抗CD33×CD3的BiTE作為支架,將PD-1的胞外區(qū)域融合到該支架上,以產(chǎn)生一種三特異性抗體,招募T細(xì)胞到CD33+AML細(xì)胞,并阻斷PD-1的免疫檢查點(diǎn)通路。

雖然目前關(guān)于bsAb和免疫檢查點(diǎn)阻斷的聯(lián)合研究大多集中在PD-1/PD-L1通路上,但其他免疫檢查點(diǎn),如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4(CTLA-4,CD152)和T細(xì)胞Ig粘蛋白3(TIM-3)也在免疫抑制性TME中發(fā)揮著不可或缺的作用。為進(jìn)一步降低外周毒性而僅對(duì)腫瘤區(qū)域進(jìn)行免疫檢查點(diǎn)阻斷,正在創(chuàng)造性地設(shè)計(jì)一組新的bsAb,以同時(shí)針對(duì)兩個(gè)不同的免疫檢查點(diǎn),例如CrossMab格式的抗PD-1/TIM-3 bsAb,或靶向檢查點(diǎn)抑制劑和T細(xì)胞共刺激受體,以IgG1形式的anti-CTLA-4×OX40bsAb(命名為ATOR 1015)。

策略三:結(jié)合CAR-T細(xì)胞療法提供共刺激信號(hào);除上述T細(xì)胞免疫抑制信號(hào)外,在缺乏共刺激信號(hào)的情況下,通過(guò)CD28或4-1BB(CD137)分子持續(xù)刺激TCR-CD3信號(hào)通路是效應(yīng)器T細(xì)胞無(wú)能或凋亡的另一個(gè)重要解釋。最初,這個(gè)問(wèn)題是通過(guò)使用抗4-1BB的單克隆抗體或4-1BBL的胞外域或抗CD28單抗作為佐劑輔助bsAb治療來(lái)解決的,顯示出效應(yīng)T細(xì)胞激活時(shí)間的延長(zhǎng)。此外,通過(guò)將腫瘤壞死因子超家族的兩個(gè)成員(包括CD40L、CD27L、OX40L和4-1BBL)融合到一個(gè)T細(xì)胞重定位的diabody,最終增強(qiáng)T細(xì)胞刺激并提高抗腫瘤活性。然而,這些解決方案顯示效應(yīng)T細(xì)胞的持續(xù)時(shí)間相對(duì)較短。為了解決這一問(wèn)題,一組研究人員提出了一種新型的T細(xì)胞靶向復(fù)合物來(lái)根除AML細(xì)胞,該復(fù)合物包括一個(gè)抗CD3×肽表位(E5B9)bsAb,即一個(gè)通用效應(yīng)器模塊和一個(gè)目標(biāo)模塊,該模塊由一個(gè)與肽表位(E5B9)融合的抗CD33單鏈抗體和一個(gè)4-1BBL的胞外域組成。與傳統(tǒng)的抗CD33×CD3的bsAb相比,該復(fù)合物不僅在激活T細(xì)胞和誘導(dǎo)CD33+腫瘤細(xì)胞溶解方面具有更高的療效,而且通過(guò)額外的共刺激信號(hào)增強(qiáng)對(duì)CD33低表達(dá)細(xì)胞的殺傷作用。更重要的是,這種新穎、靈活的模塊化系統(tǒng)可使抗腫瘤功能長(zhǎng)期增強(qiáng),在腫瘤中具有廣泛的應(yīng)用潛力。此外,為了提供長(zhǎng)效效應(yīng)T細(xì)胞功能,其他研究人員已經(jīng)制定了一種優(yōu)化策略,將bsAb策略與CAR-T細(xì)胞策略相結(jié)合,產(chǎn)生了一組新的bsAb。這種新的bsAb,命名為frBsAb,是由兩個(gè)單抗的化學(xué)異共軛,融合葉酸受體(FR)和所選擇的TAA。相應(yīng)地,轉(zhuǎn)化的T細(xì)胞被稱(chēng)為BsAb-IR28z,其細(xì)胞外FR結(jié)構(gòu)域連接到CD8α-鉸鏈和跨膜區(qū);細(xì)胞內(nèi)CD3z部分與CD28融合。因此,當(dāng)frBsAbs將腫瘤細(xì)胞(通過(guò)對(duì)TAA的識(shí)別)交聯(lián)到介導(dǎo)的T細(xì)胞時(shí),它們不僅誘導(dǎo)短暫的T細(xì)胞活化,而且通過(guò)同時(shí)刺激共刺激分子CD28防止無(wú)能或抗原誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡,最終發(fā)揮增強(qiáng)的抗腫瘤能力。在共刺激分子中,CAR-T細(xì)胞和bsAbs的結(jié)合也提供了許多優(yōu)點(diǎn),并且作為一種有前途的治療惡性腫瘤的方法正在獲得發(fā)展。最近,人們又設(shè)計(jì)了一種用于治療多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)的單一基因修飾T細(xì)胞產(chǎn)物CAR-T-EGFRvIII。BiTE-EGFR細(xì)胞分泌額外的抗EGFR×CD3,同時(shí)保持傳統(tǒng)的CAR-T細(xì)胞骨架,并在T細(xì)胞表面表達(dá)EGFRvIII。由于EGFR和EGFRvIII都是GBM腫瘤細(xì)胞的關(guān)鍵靶點(diǎn),這種創(chuàng)新性的發(fā)明比CAR-T細(xì)胞和bsAb作為單一療法更具優(yōu)勢(shì),因?yàn)樗�不僅證實(shí)了抗原陽(yáng)性腫瘤亞型的有效抗腫瘤反應(yīng),而且對(duì)健康組織相對(duì)安全,而且還避免了其親本技術(shù)的缺點(diǎn),如腫瘤抗原異質(zhì)性、全身應(yīng)用相關(guān)非特異性毒性、持續(xù)注射的必要性、出現(xiàn)免疫抑制、T細(xì)胞衰竭等。

本質(zhì)上,到目前為止,一組創(chuàng)新的通用或模塊化的CAR-(modCAR-)T細(xì)胞及其各自的適配器分子(CAR適配器)已經(jīng)被用來(lái)規(guī)避傳統(tǒng)CAR-T細(xì)胞的一些致命的副作用。該策略將TAA識(shí)別和T細(xì)胞激活分為兩部分,并依賴(lài)于CAR適配器作為橋梁,將modCAR-T細(xì)胞重定位于多個(gè)TAA,并使用相同的modCAR-T細(xì)胞來(lái)靶向多種腫瘤類(lèi)型,這樣可以精細(xì)調(diào)節(jié)效應(yīng)T細(xì)胞的功能而無(wú)需清除掉它們。目前,CAR適配器可根據(jù)其結(jié)構(gòu)分為幾個(gè)亞型,包括小分子(如葉酸和異硫氰酸熒光素)、單價(jià)和二價(jià)納米體、單鏈抗體、Fabs和Abs。

雙特異性策略與NK細(xì)胞

迄今為止,增強(qiáng)抗腫瘤免疫的大多數(shù)嘗試都集中在通過(guò)CAR-T細(xì)胞或bsAb來(lái)增強(qiáng)T細(xì)胞的反應(yīng),特別是在blinatumomab成功后。然而,值得注意的是,這種T細(xì)胞靶向治療受到一些毒副作用的限制,其中最具挑戰(zhàn)性的是致命的細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS)。盡管人們已經(jīng)做出很大努力通過(guò)阻斷IL-6或抑制單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞活化來(lái)逆轉(zhuǎn)CRS,但在保持充分治療潛力的同時(shí)實(shí)現(xiàn)最佳毒性管理仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。此外,由于大多數(shù)T細(xì)胞重定位靶向bsAb旨在對(duì)抗血液惡性腫瘤,bsAb介導(dǎo)的關(guān)于實(shí)體瘤的治療還需要進(jìn)一步的研究。NK細(xì)胞作為天然免疫抗腫瘤的一線戰(zhàn)士,在過(guò)去的幾十年里也引起了廣泛的關(guān)注。在人類(lèi)中,各種研究表明NK細(xì)胞功能受損或缺失與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的高風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。值得注意的是,高比例的NK細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)體瘤與更好的臨床療效相關(guān),這已在結(jié)直腸癌、乳腺癌、透明細(xì)胞腎癌、頭頸癌和咽部癌中得到證實(shí)。因此,通過(guò)免疫治療靶向NK細(xì)胞是一種很有吸引力的抗腫瘤策略。

從機(jī)制上講,活化的NK細(xì)胞可以通過(guò)三種直接或間接的策略清除腫瘤細(xì)胞:(a)釋放顆粒,如分泌性溶酶體,其中含有穿孔素和顆粒酶,誘導(dǎo)細(xì)胞膜溶解或凋亡;(b)通過(guò)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體和Fas配體在腫瘤細(xì)胞上的相互作用來(lái)激活靶細(xì)胞caspase;(c)分泌多種因子調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞功能,間接殺傷腫瘤細(xì)胞�；�于這些理論,NK細(xì)胞接合器(NKCEs)和CAR-NK細(xì)胞被設(shè)計(jì)用來(lái)利用NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性來(lái)對(duì)抗腫瘤。NKCE是通過(guò)連接抗NK細(xì)胞受體(主要是CD16)和一個(gè)TAA (bispecific killer engagers, BiKEs)或兩個(gè)TAA(trispecific killer engagers, TriKEs)的單鏈抗體來(lái)構(gòu)建的。到目前為止,抗CD16的BiTEs已經(jīng)被有效地用于針對(duì)廣泛的TAA,包括CD19、CD20、CD30、CD33、CD133和EPCAM。

抗CD30×CD16A的BiKE(AFM13)的治療復(fù)發(fā)或難治性CD30+霍奇金淋巴瘤或NHL的I/II期臨床試驗(yàn)結(jié)果已發(fā)表。有趣的是,在一項(xiàng)骨髓增生異常綜合征(MDS)的研究中,抗CD16×CD33的BiKE不僅能根除CD33+MDS細(xì)胞,而且還能靶向CD33+髓源性抑制細(xì)胞,以逆轉(zhuǎn)TME中的免疫抑制,提高抗腫瘤的療效。相比之下,使用額外的單鏈抗體,TriKEs通過(guò)靶向更多的taa或共同作用更多的NK細(xì)胞激活受體靶獲得了更多的益處。最近,報(bào)道了一種顯著的三功能NKCE,它與NK細(xì)胞上的CD16和NKp46(一種天然細(xì)胞毒性受體(NCR))以及腫瘤細(xì)胞上的TAA共同作用。在侵襲性和實(shí)體性B細(xì)胞淋巴瘤的小鼠模型中,這種設(shè)計(jì)巧妙的TriKE導(dǎo)致NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性充分激活和增強(qiáng),并顯示出比分別激活CD16和NKp46的BiKE更有效的抗腫瘤功能。此外,另外一個(gè)設(shè)計(jì)增加了IL-15交聯(lián)劑,將抗CD16×CD33的BiKE升級(jí)為T(mén)riKE,由于NK細(xì)胞自我持續(xù)增殖,從而提高了腫瘤細(xì)胞殺傷效率。值得注意的是,抗CD16×IL-15×CD33的TriKE(GTB-3550)的單中心I/II期臨床試驗(yàn)已經(jīng)在進(jìn)行中,用于治療CD33+高危MDS,難治性/復(fù)發(fā)性AML,或晚期全身性肥大細(xì)胞增多癥。除了優(yōu)越的抗腫瘤作用外,BiKE和TriKE還比T細(xì)胞接合器具有更低的毒性和更高的安全性,這意味著CRS或非靶向細(xì)胞毒性的風(fēng)險(xiǎn)更低,在實(shí)體腫瘤中的應(yīng)用前景更廣闊。與NKCE類(lèi)似,成熟的NK細(xì)胞也可以作為一個(gè)有趣的候選細(xì)胞來(lái)表達(dá)CARs,對(duì)抗豐富的TAA,如CD19、CD20、CD244和HER2。

原位bsAb

盡管bsAb取得了巨大的成功,但外源性給藥的治療潛力受到了短循環(huán)動(dòng)力學(xué)和靶向非腫瘤毒性的阻礙。因此,研究人員提出了原位生成bsAb的概念,以克服免疫抑制性TME,避免持續(xù)的藥物輸注。目前,在腫瘤組織中制備bsAb的方法主要有工程溶瘤病毒(OVs)、轉(zhuǎn)染T細(xì)胞和轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。

2015年,FDA批準(zhǔn)了Imlygic,即轉(zhuǎn)基因溶瘤HSV療法 talimogene laherparepvec(T-VEC),并表達(dá)GM-CSF,用于治療晚期黑色素瘤。這代表了OVs的一個(gè)里程碑,并促進(jìn)了大量的臨床前研究和臨床試驗(yàn)。由于腫瘤特異性表達(dá)和病毒介導(dǎo)的T-cell募集的優(yōu)勢(shì),OVs是一個(gè)誘人的bsAb輸送平臺(tái)。目前,這些攜帶BiTEs的OVs正在進(jìn)行臨床前評(píng)估:產(chǎn)生抗CD3×EphA2 BiTE的EphA2-T細(xì)胞疫苗病毒;抗EGFR×CD3 BiTE的腺病毒(ICOVIR-15K);抗CD3×CEA/CD20 BiTE的麻疹病毒(MV-BiTE);抗EpCAM×CD3 BiTE的工程化溶瘤B組腺病毒Enadenoutucirev(EnAd)。第一個(gè)攜帶BiTE的OV是一個(gè)雙清除的痘苗病毒(western reverse Straine),其被設(shè)計(jì)為編碼EphA2靶向BiTE,在A549肺癌異種移植模型中,加入外源性IL2可提高T細(xì)胞的體外活化和增殖,并提高存活率。后來(lái),研究人員對(duì)腺病毒ICOVIR-15K進(jìn)行了修飾,以產(chǎn)生抗EGFR×CD3的BiTE,成功地在不增加IL-2的情況下促進(jìn)T細(xì)胞增殖。另一個(gè)類(lèi)似的結(jié)構(gòu),MV-BiTE,為免疫功能正常的小鼠和實(shí)體瘤異種移植模型提供持續(xù)的免疫保護(hù),并促進(jìn)腫瘤的長(zhǎng)期消退而不復(fù)發(fā)。攜帶抗EpCAM×CD3 BiTE的EnAd進(jìn)一步顯示了殺死靶細(xì)胞的能力,同時(shí)克服了人類(lèi)原發(fā)惡性腹水樣本中的免疫抑制性TME。總的來(lái)說(shuō),工程化產(chǎn)生BiTE的OVs可以通過(guò)非特異性的直接溶瘤或感染抗原陽(yáng)性的癌細(xì)胞來(lái)攻擊和殺死癌細(xì)胞,然后是BiTE的復(fù)制依賴(lài)性表達(dá),激活內(nèi)源性CD4+和CD8+T細(xì)胞,從而對(duì)這些癌細(xì)胞產(chǎn)生免疫介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。這種改進(jìn)的溶瘤病毒療法由于其優(yōu)于傳統(tǒng)的OVs或bsAb而具有光明的前景:(a)來(lái)自修飾OVs的biTEs選擇性地靶向抗原陽(yáng)性的癌細(xì)胞,而不依賴(lài)于MHC/TCR分子呈現(xiàn)或其他共刺激信號(hào),因此,即使在癌細(xì)胞失去MHC表達(dá)的情況下,也能提高抗腫瘤T細(xì)胞反應(yīng)的效力并激發(fā)免疫。(b) 在晚期病毒啟動(dòng)子的控制下,通過(guò)限制病毒感染癌細(xì)胞的持續(xù)BiTE產(chǎn)生,不僅使系統(tǒng)毒性最小化,而且使BiTE在TME中的濃度大大提高,同時(shí)也解決了BiTE的半衰期短的問(wèn)題。(c) OVs主要在癌細(xì)胞中感染和復(fù)制,并在細(xì)胞間傳播,減輕了鄰近健康組織的損傷。(d)BiTE既可以針對(duì)病毒感染的癌細(xì)胞,也可以針對(duì)未感染抗原陽(yáng)性的癌細(xì)胞。(e) 改良OVs可刺激CD4+和CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)免疫,同時(shí)規(guī)避免疫抑制。(f) 該方法安全性高,毒副作用小,應(yīng)用方便。此外,與靶向腫瘤抗原的改良OVs類(lèi)似,攜帶BiTEs靶向間質(zhì)細(xì)胞抗原的OVs對(duì)難治性、富間質(zhì)性腫瘤有較好的療效。編碼以成纖維細(xì)胞活化蛋白(FAP)為靶點(diǎn)的基因工程酶,不僅可以殺死感染和復(fù)制的腫瘤細(xì)胞,而且還可以利用隨后產(chǎn)生的抗FAP的BiTE激活T細(xì)胞,選擇性地耗盡FAP+癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)。它們最終逆轉(zhuǎn)CAF介導(dǎo)的免疫抑制,打破間質(zhì)屏障,使OVs滲透到腫瘤部位,并協(xié)同使TME恢復(fù)到免疫反應(yīng)狀態(tài)。

轉(zhuǎn)染自體腫瘤特異性T細(xì)胞;目前,轉(zhuǎn)染的自體腫瘤特異性T細(xì)胞由于實(shí)現(xiàn)了CAR-T細(xì)胞與bsAb的理論結(jié)合,并克服了兩者的局限性而備受關(guān)注。近十年前,當(dāng)人類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞,尤其是CD3+T細(xì)胞,被工程化的基于HIV-1的慢病毒載體轉(zhuǎn)染,在體內(nèi)產(chǎn)生抗CEA×CD3 diabody的細(xì)胞時(shí),淋巴細(xì)胞首次被認(rèn)為是bsAb的載體。最近,CD123-ENG T細(xì)胞可以證明這一點(diǎn),它是由一種編碼雙特異性接合器分子的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的,該分子靶向AML和CD3+T細(xì)胞的CD123+腫瘤細(xì)胞。從機(jī)制上講,ENG T細(xì)胞不僅識(shí)別和殺死CD123+腫瘤細(xì)胞,而且通過(guò)抗原依賴(lài)性的BiTE分泌,將未修飾的旁觀者T細(xì)胞重定向并激活到腫瘤部位,協(xié)同產(chǎn)生強(qiáng)大的抗腫瘤免疫反應(yīng)。此外,為了避免對(duì)正常造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞的意外和過(guò)度殺傷,CD20．CD123-ENG T細(xì)胞被設(shè)計(jì)為包含自殺基因CD20,它允許在利妥昔單抗和補(bǔ)體存在下選擇性耗竭。其他類(lèi)似的ENG T細(xì)胞包括EphA2-ENG T細(xì)胞和CD19-ENG T細(xì)胞。此外,一些研究人員通過(guò)mRNA電穿孔技術(shù)和快速T細(xì)胞擴(kuò)增方案構(gòu)建了CD19-BiTE轉(zhuǎn)移的T細(xì)胞,在體外和侵襲性Nalm6白血病小鼠模型中,與CAR RNA轉(zhuǎn)染的T細(xì)胞相比,其抗腫瘤免疫能力也得到增強(qiáng)。轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞顯示出明顯的優(yōu)越性,因?yàn)橐坏┍患せ?就會(huì)產(chǎn)生增強(qiáng)的BiTE,將駐留的T細(xì)胞重新定向到腫瘤部位。為了進(jìn)一步提高抗腫瘤效率,將共刺激分子CD28和/或4-1BBL引入ENG T細(xì)胞表面,即CD19-ENG．4-1BBL/CD80,顯著增加抗原依賴(lài)性細(xì)胞因子(IL-2和IFNγ)的產(chǎn)生,并促進(jìn)T細(xì)胞的增殖,最終在體內(nèi)外表現(xiàn)出最佳反應(yīng)。

轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)除了腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞外,MSC也可以作為一種細(xì)胞載體,實(shí)現(xiàn)bsAb的原位穩(wěn)定表達(dá)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫原性低、向腫瘤部位遷移的趨勢(shì)、追蹤顯微轉(zhuǎn)移的能力以及易于通過(guò)病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。在一項(xiàng)研究中,通過(guò)慢病毒載體對(duì)永生化人源性MSC系(SCP-1)進(jìn)行了基因修飾,以產(chǎn)生完全人源化的抗CD33×CD3 bsAb提高共刺激分子4-1BBL的表達(dá)。增強(qiáng)的抗抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)使MSCs成為bsAb靶向腫瘤的有效傳遞者,從而延長(zhǎng)腫瘤消退時(shí)間。另一項(xiàng)研究使用轉(zhuǎn)染的人臍帶來(lái)源的MSCs分泌抗CD19×CD3 TandAbs,同時(shí)使用吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)途徑抑制劑,D-1MT,證明這種組合是一種很有前途的治療策略。此外,E1A修飾的MSCs也可以被設(shè)計(jì)成病毒轉(zhuǎn)運(yùn)體和放大器,釋放工程腺病毒并在到達(dá)腫瘤部位或轉(zhuǎn)移灶后重新感染腫瘤細(xì)胞,它們分泌bsAb并激活T細(xì)胞對(duì)腫瘤的反應(yīng)。這是一個(gè)雙重病毒裝載MSC(命名為MSC．CD3-HAC．E1A)攜帶雙功能融合蛋白CD3-HAC,由抗CD3單鏈抗體和高親和力共識(shí)(HAC)PD-1組成,最終促進(jìn)腫瘤的消除和逆轉(zhuǎn)TME的免疫耐受。

Minicircle(MC);MC是體內(nèi)生產(chǎn)bsAb的另一種有前途的替代品。它是一組非病毒性的DNA載體,通過(guò)流體動(dòng)力學(xué)過(guò)程將轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物輸送到小鼠肝臟后,能夠持續(xù)高水平地表達(dá)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物。一些研究人員利用MC設(shè)計(jì)了MC-bsAb,生成了抗CD20×CD3-bsAb,在體外和異種移植小鼠模型中介導(dǎo)T細(xì)胞殺傷人類(lèi)B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。這種方法非常有吸引力,因?yàn)樗�相�?duì)穩(wěn)定,價(jià)格低廉,并且能夠在數(shù)周甚至更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持血液循環(huán)中的bsAb的治療濃度。

展望

在過(guò)去的30年里,人們目睹了一個(gè)巨大的轉(zhuǎn)變,從僅僅開(kāi)發(fā)和改造基本的Abs,發(fā)展到更復(fù)雜的Ab衍生物,其形狀和尺寸多種多樣,尤其是bsAb。bsAb技術(shù)在臨床應(yīng)用中具有非凡的前景,吸引了研究人員的注意并已發(fā)展出極為豐富的形式,為基于BSAB的癌癥免疫治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。截至2019年9月20日,NCBI的官方網(wǎng)站上共發(fā)布了183項(xiàng)bsAb的臨床試驗(yàn)(大多數(shù)在癌癥領(lǐng)域)。然而,盡管有上述各種各樣的策略,商業(yè)化生產(chǎn)bsAb藥物的過(guò)程仍然受到各種障礙的阻礙。更具體地說(shuō),bsAb的制造既耗時(shí)又昂貴。它需要合適、安全、經(jīng)濟(jì)的細(xì)胞系生產(chǎn)、程序、分析和純化方法來(lái)獲得所需的產(chǎn)品。此外,Ab生產(chǎn)后的一系列問(wèn)題,包括但不限于Abs的降解、聚集、變性、破碎和氧化,必須在給到患者之前解決。同時(shí),還需要更多的臨床試驗(yàn)來(lái)探索最佳給藥途徑和最佳劑量,以提高靶組織的濃度,減少全身副作用,甚至是控釋制劑。

總體而言,據(jù)估計(jì),目前臨床試驗(yàn)中的大多數(shù)bsAb(67%)旨在對(duì)抗血液惡性腫瘤。相比之下,靶向?qū)嶓w腫瘤的bsAb值得進(jìn)一步研究,因?yàn)槠鋵?duì)正常組織或其他復(fù)雜因素(包括免疫耐受性癌間質(zhì)、新生血管紊亂,bsAb藥物的滲透不足)有不可避免的不良影響。因此,人們對(duì)正在進(jìn)行的實(shí)體腫瘤中的bsAb研究充滿(mǎn)熱情,這些研究有望在不久的將來(lái)產(chǎn)生有希望的結(jié)果,盡管將bsAbs轉(zhuǎn)化為臨床適用的藥物可能耗時(shí)且需要大量的努力。總之,bsAb研究的結(jié)果證明了這些分子在新的藥物設(shè)計(jì)和隨后的癌癥治療臨床應(yīng)用中的前景。

參考文獻(xiàn):

Challenges and strategies for next-generation bispecific antibody-based antitumor therapeutics． Cell Mol Immunol． 2020 May;17(5):451-461．